TÉCNICA DE STOLL

S.E.M.S                                               DGETI

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de Servicios No. 199

PRACTICA 7

“TÉCNICA DE STOLL”

FECHA DE REALIZACIÓN:

ALUMNO: VÍCTOR MANUEL MERA ÁLVAREZ

3º DM LAB CLÍNICO

DR. VICENTE MARTÍNEZ FRAGOSO

OBJETIVO:

Aprender mediante esta técnica a realizar una observación de materia fecal y después de haber localizado un cierto parasito, determinara la intensidad de la infestación, mediante un conteo de los mismos.

FUNDAMENTO:

Por lo general la sintomatología de las enfermedades parasitarias se relaciona en gran medida con el número de parásitos dentro del huésped. Se tienen registradas algunas de las eliminaciones diarias de huevecillos de varias especies de helmintos y con ello se establecen cálculos con los que se define la posible intensidad de las patologías. Sobre los resultados  influyen algunos aspectos  como la dieta, la mala digestión, los ciclos de producción de los huevos así como la consistencia de las heces.

Para manifestar  al paciente un buen resultado es conveniente realizar conteos de muestras de heces fecales recolectadas en diferentes días y de manera continua para así poder establecer un parámetro o promedio diario de liberación de huevos.

MATERIAL:                                                       

·         Aplicador                                                             

·         Tubos cónicos de 15 ml

·         Pipeta y propipeta

·         Porta y cubreobjetos

SUSTANCIAS

·         Hidróxido de sodio 0.1 N

·         Cuentas de vidrio

Ø  Con ayuda de un aplicador se agrega una pequeña cantidad de materia fecal hasta elevar a 6 ml.

Ø  Se añaden 10 cuentas de vidrio, se tapa el tubo cónico  y se agita de manera que las heces se disuelvan lo mejor posible. (En algunos caso puede ser necesario que se deje reposar varias horas o bien una noche en refrigeración para que se ablanden)

Ø  <蔄ȝ>Después de que la materia fecal este ya disuelta por completo se agita nuevamente un minuto para después tomar una gota de la suspensión y colocarla en un portaobjetos con su respectivo cubre.

Ø  Observar al microscopio (el conteo se hace con el objetivo 40x para mayor claridad)

OBSERVACIONES:

En las siguientes imágenes se muestran los resultados aunque por  obvio solo son de lo que se logra observar en un campo con ello se aclara que no son el resultado de un conteo.

en la imagen anterior se puede observar una fibra vejetal y algo parecido a un huevo, en forma circular

CONCLUSIONES

Aunque no se realizo un verdadero conteo, puedo comentar que la realización de la practica además de no ser tan complicada de realizar es interesante por tener un objetivo diferente a las anteriores, ya que como se menciono es una técnica cuantitativa. Aun así su realización puede ser como un complemento de aquellas en las que su finalidad era cualitativa.

Aunque como se dijo no se realizo un conteo, a continuacion se muestran las formulas para realizarlo, factores y demas cosas para poder obtener un numero de huevecillos en cierto volumen de materia fecal.

Calculo:

1.- La disolución fecal original es de 1 en 15 (4ml/60ml). Como se contaron los huevos en un volumen total de 0.15 ml, el número  total de  éstos en 1ml de heces se encuentran al multiplicar la cuenta total por 100 (1/5 x 0.15 x 100=1).

2.- Suponiendo que el promedio de una persona rebasa los 100 g de heces por día, es posible calcular el número de huevos por día  multiplicando  el resultado por 100 ( o la cuenta de la suspensión original por 10000).

3.- Para determinar el número de parásitos hembras presentes, se divide el número diario de huevecillos que hay en las heces entre el número promedio de

hembra de la especie Necator: 7000 huevos/día

hembra de la especie Ascaris:  200000 huevos /día

hembra de la especie Trichuris: 7500 huevo/día

4.- Se encuentra la cantidad total de parásitos al multiplicar por dos resultado encontrado en el paso tres, ya que se supone que en cualquier infestación  hay un parásito macho por cada parásito hembra.

5.- Algunos técnicos creen que se deben utilizar los factores de correlación de la consistencia de las heces para obtener resultados más exactos. Para esto, se debe multiplicar el número que se obtiene en el paso uno por el factor apropiado. Heces formadas= 1, blandas formadas=1.5, blandas diarreicas=3, fluidas diarreicas=4, muy líquidas=5.

FUENTES DE INFORMACION:

DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO DE NEMATODES, “TENNICA STOLL”

CONSULTADO EN usuarios.multimania.es/paraelsa/manual04/practica-8.htm

EL DIA SABADO 1 DE OCTUBRE 12:15 PM

MÉTODO DE CONCENTRACIÓN-FLOTACIÓN DE FAUST

S.E.M.S                                               DGETI

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de Servicios No. 199

PRACTICA 3

“MÉTODO DE CONCENTRACIÓN-FLOTACIÓN DE FAUST”

ALUMNO: VÍCTOR MANUEL MERA ÁLVAREZ

3º DM LAB CLÍNICO

FECHA DE REALIZACION:  jueves 8 de septiembre 2011

DR. VICENTE MARTÍNEZ FRAGOSO

Fundamento:

Este método se utiliza solución de Zn, cuya densidad especifica es de 1.180 (33%), que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos: necátor 1.055, tricocéfalo 1.150. áscaris fértil 1.110 y facilita que los huevos  livianos de estos helmintos, con menor peso especifico que la solución, se concentren y floten.

La concentración adecuada aconsejada es la que usa como reactivo una solución acuosa de sulfato de Zn al 33% con una densidad al 1.180.  El agua utilizada diluye y lava la materia fecal. El filtrado con gasa doblada, evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugación enriquece en delgada película la superficie del líquido  centrifugado con los huevos livianos de algunos helmintos.                                          

Material                                                                 Sustancias:                                                                                                                   

Ø  Porta y cubreobjetos                                        Solución acuosa de sulfato de Zn

Ø  Gasas                                                               Lugol                                                     

Ø  Tubos de ensaye                                              Agua destilada

Ø  Sol. Acuosa de sulfato de Zn    

Ø  Embudo

Ø  Asa de platino

Ø  Centrifuga

Técnica:

1)    Mezclar bien una porción me materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.

2)    Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de ensaye, ayudándose con un embudo pequeño.  

3)    Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1 min.

4)    Decantar  el líquido sobrenadante  y completar con agua destilada hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Re suspender el sedimento.

5)    Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el líquido sobrenadante esté listo.

6)    Decantar nuevamente el líquido sobrenadante, remplazarlo por igual cantidad de solución de Zn al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento. Centrifugar durante 1 minuto a 1500 rpm.

7)    Tomar 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del líquido. Colocarlos en un porta-objetos y mezclarla con 1-2 gotas de lugol, colocar cubre-objeto.

8)    Examinar al microscopio y reportar los resultados.

Método indicado para el diagnostico de huevos livianos de helmintos (necátor, tricocéfalos, áscaris H. nana)               

OBSERVACIONES:

Durante la realización de la practica todo salió correctamente, esto se debe a que anteriormente se había realizado la práctica, pero en este caso se  tiene un objetivo mas, identificar el tipo de microorganismo dentro de las muestras, es decir que más adelante observaremos los resultados obtenidos, mediante fotografías tomadas y cada una de ellas con una pequeña descripción de que es lo que se encontró.

Entre otras cosas al momento de realizar la práctica la muestra de heces presento una apariencia endeble y un color café, así mismo a la hora de centrifugar se presento demasiado sedimento.

Evidencias:

De cierta forma cada una de las imágenes colocadas en los pasos anteriores sirve como evidencia, pero preferí colocar hasta el final únicamente las imágenes de lo que se observo y así mismo con ayuda de comparaciones en libros, poder escribir de qué se trata cada una de ellas.

SE OBSERVAN: Fibras musculares no digeridas y Cristales de ácidos grasos

COMENTARIOS:

Únicamente me gustaría hacer mención sobre lo fácil que puede parecer hacer esta práctica, claro si se le toma interés, pero hay algo que si considero no precisamente difícil si no como algo que requiere de mucha más concentración, “el análisis de las muestras”, ya que de este depende el posible resultado a ofrecer al paciente, es por ello que recomendaría practicar mas para que así todo lo podamos hacer completamente bien.

SEM                                               DGETI

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de Servicios No. 199

PRACTICA 1

“COPROPARASITOSCOPICO DIRECTO”

ALUMNO: VÍCTOR MANUEL MERA ÁLVAREZ

3º DM LAB CLÍNICO

FECHA DE REALIZACION:MARTES 30 DE AGOSTO 2011

DR. VICENTE MARTÍNEZ FRAGOSO

MÉTODO DIRECTO: FROTIS

Fundamento: este método solo sirve para evidenciar la presencia de un determinado parasito, y se trata de un método cualitativo que no permite conocer el núm. De formas larvarias que hay por cada gramo de heces y por lo tanto la carga parasitaria.

Frotis fresco: es un método rápido pero poco seguro. Tiene posibilidad de falsos positivos, por lo que es necesario repetir. Permite observar la motilidad de los microorganismos: amiba y otros flagelados. Detecta quistes y huevos de helmintos. Precisa una concentración.

Muestra biológica: heces fecales

Material:                                                            Sustancias

Ø  Portaobjetos                                           * sol. fisiológica

Ø  Cubreobjetos                                           *sol. De yodo

Ø  Microscopio

Ø  Pipeta Pasteur

Ø  Vaso de precipitado

Procedimiento:

   Sobre un portaobjetos limpio se coloca una pequeña porción de materia fecal.

Se agrega una gota de solución fisiológica

Se coloca cubreobjetos

    Se observa primero sin teñir.

En otro portaobjetos limpio se repite el mismo procedimiento pero ahora se tiñe con la tinción de yodo.

v  Es importante que los frotis no sean densos, sino transparentes, y que se haga la observación con diferentes muestras.

v  Tras la observación de trofozoitos se utiliza la tinción  de yodo que tiñe quistes y destaca sus detalles (los trofozoitos mueren y resultan identificables).

v  La observación se hace con seco débil (10x) y con poca luz; al encontrarse estructuras sospechosas se observa con el objetivo seco fuerte (40x).

Resultados:

En las siguientes imágenes se plasman los resultados, haciendo referencia de que se encontró y demás características.

Nota: la definición es poco clara, puesto que se tomo una fotografía con un teléfono celular al campo en observación por medio del ocular.

Seco débil (10x)

“sol. Fisiológica”

Se observaron:

“Cristales de ácidos grasos”



Seco débil (10x)

“sol. Yodo”

Se observaron:

“Fibras en espiral”

Conclusión: la práctica de coproparasitoscopico directo ya se había realizado, así como el de centrifugación, pero lo importante de recordar en este caso no es eso, sino la importancia que tiene el correcto análisis de las muestras, por que como ya se dijo es necesario repetir para no cometer errores a la hora del diagnostico, también considero importante el seguir conociendo su clasificación (microorganismos) para no solo hacer la practica correctamente, también el posible resultado del que dependerá si se administra o no medicamento, así como de qué tipo, y es ahí donde entra la salud del paciente que es responsabilidad de quien realiza este procedimiento.

Fuentes de informacion:

Técnicas coproparasitoscópicas, http://html.rincondelvago.com/parasitologia_5.html

Fecha :30 de agosto 2011

CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de Servicios No. 199

DESARROLLAR TÉCNICAS PARASITOLÓGICAS

PRACTICA: 5

“MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE”

DR. VICENTE MARTÍNEZ FRAGOSO

ALUMNO: VÍCTOR MANUEL MERA ÁLVAREZ

3º DM LAB. CLÍNICO

EQUIPO 3

CICLO ESCOLAR AGOSTO 2011/ ENERO 2012

FECHA DE REALIZACIÓN: JUEVES 15 DE SEPTIEMBRE

FECHA DE ENTREGA: SÁBADO 17 DE SEPTIEMBRE

INTRODUCCIÓN

La siguientees una técnica que forma parte de una serie de análisis coproparasitoscopicos la cual se tiene registro que fue descrita por Ritchie en 1948, es de utilidad para la búsqueda de huevos, quistes y larvas. Es empleada cuando no se observan parásitos en el método directo y de esta manera aumenta la probabilidad de observar parásitos en las muestras de heces fecales analizadas.

FUNDAMENTO: este es otro de los diferentes métodos con los que se puede realizar la técnica para la búsqueda de posibles microorganismos en materia fecal, el cual se basa en la concentración de los quistes y huevos por medio de la sedimentación,  apoyada de algo sumamente importante e indispensable,  “la centrifugación”,  así mismo se requiere el uso de dos sustancias químicas las cuales son el formol y el éter,  quienes  actuaran separando los elementos parasitarios para de esa manera facilitar su visualización. El procedimiento ya está definido, y es por ello que se pueden mencionar ciertas ventajas en esta práctica, un ejemplo de ello puede ser que el hecho de que se concentra evita que se deformen las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

PROCEDIMIENTO:

1)    Con la ayuda de un abate lenguas se vierten aprox. 1 gramo de materia fecal en el vaso de precipitado para después colocar y mezclar con 10 ml de solución salina hasta homogeneizar.





2)    Se filtra la mezcla utilizando la gasa doblada en cuatro por encima del embudo para de esa manera recolectar el producto en el tubo cónico.

3)    El siguiente paso es el de  centrifugar la suspensión durante 2 min a 2000 rpm.

4)    Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces más.



DECANTACION



CENTRIFUGACIÒN





5)    Terminado el paso anterior al último sedimento se le debe de agregar 5 ml de formaldehido al 10 %, se mezcla y se deja reposar durante 10 min.